btx ecm399 电转仪怎么样,毕氏酵母

1、btx ecm399 电转仪怎么样

ECM 399 是1款指数衰减波电穿孔系统，其提供的电场强度和脉冲强度是专为细菌和酵母的简单转化而设计的。在低压模式中，ECM®399也可以运用于部分哺乳动物细胞实验，是科研和教学中基本转化实验的理想选择，操作简单，易学易用（开机、设定电压、放电），经济实惠，1体化设计，便于携带。

2、毕氏酵母

构建恶性疟原虫主要裂殖子表面蛋白1C末端相对分子质量1.9万片段（MSP1�19）毕氏酵母真核表达克隆。方法 利用PCR技术扩增出MSP1�19，插入pPIC9载体中，鉴定正确的MSP1�19基因，插入毕氏酵母分泌型表达载体pPIC9k中，DNA测序鉴定序列的正确性，转化酵母细胞。结果 筛选出的阳性克隆为MSP1�19表达克隆。结论 用分子生物学方法重组构建的MSP1�19毕氏酵母真核表达克隆，为高效表达MSP1�19及其活性鉴定奠定了基础。

〔关键词〕 基因，MSP1�19；基因扩增；疟原虫，恶性；毕氏酵母；真核表达；聚合酶链反。

3、求助：毕赤酵母感受态细胞的制备方法

1、毕氏酵母氯化锂转化法

(1)试剂 1M LiCl(用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌;必要时用消毒去离子水稀释) 50% PEG3350(Sigma P3640 用去离子蒸馏水配制，滤膜过滤除菌，用较紧的盖子的瓶子分装) 2mg/ml salmon sperm DNA / TE(10mM Tris-Cl, pH8.0, 1.0mM EDTA)-20℃保存 注：醋酸锂对毕氏酵母无效，仅氯化锂有效;PEG3350可屏蔽高浓度LiCl的毒害作用;

(2)感受态毕氏酵母的制备 接种Pachia pastoris到50ml YPD培养基中，30℃摇菌过夜(约24～28h)培养到OD值为0.8～1.0(约108 Cells/ml); 收获细。

4、请问谁有酿酒酵母感受态的制备方法与步骤及电转化酿

在精编分子生物学实验指南上有1部分讲到了酿酒酵母，电转化具体过程如下：

1）将转化用酵母菌株的单菌落接种于5ml YPD培养基中，30度过夜培养至饱和。

2）转化前1天晚上，在装有500ml YPD培养基的2L无菌烧瓶中接种适量的过夜培养液，于30度剧烈振摇，直到细胞密度达1*10的8次方（OD600约为1.3-1.5）。

3）于4度4000g离心收获培养细胞，细胞用80ml无菌水重悬。为了增加细胞对电击的感受性，继续步骤4。如果不需要可接步骤6

4）加入10ml， pH7.5，10*TE缓冲液，摇晃均匀，再加入10ml10*乙酸锂，旋转摇匀，于30度请请摇动45min

5）加入2.5ml 1 mol/L DTT,并同时旋转摇动，于30度轻轻摇动15m。

5、毕赤酵母的表达质粒是什么 ppic9

前言：水蛭肽(hirulog)是模仿天然水蛭素设计合成的肽类凝血酶抑制剂，是1种极具潜力的抗(溶)栓药物。经过文献查新，我们设计并合成了1段长度为100bp的DNA序列作为目的基因片段，克隆进载体pBluescript-M13后进行了核苷酸测序及物理图谱的绘制。本研究选用了近年来日益被国际上认可的巴斯德毕赤酵母作为基因表达系统，分泌型质粒pPIC9为载体。首先以质粒pBluescript-hir为模板，PCR反应扩增含目的基因的片段hir-1，hir-1经限制型内切酶SnaBⅠ和NotⅠ酶切后与经同样酶切处理的pPIC9连接，形成重组质粒pPIC9-hir。把pPIC9-hir用BglⅡ酶切线性化后电穿孔转化入巴斯德毕赤酵母GS115。经筛选得到his。